三种灵芝不同部位的活性成分含量差异性分析(2)
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参见附件。
2.3 灵芝酸A和灵芝酸B含量的测定
2.3.1 色谱条件 Kromasil 100-5C18色谱柱(250mm× 4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液；采用梯度洗脱，梯度洗脱条件；0～5min，27%～30%；乙腈：5～50min，30%；乙腈：50～60min，30%～35%；乙腈。柱温为25℃；流速：0.8mL/min；进样量10μL；检测波长254nm。色谱图见图1。
2.3.2 供试品溶液制备 精密称取菌盖及菌柄样品2g，加入50mL三氯甲烷，超声处理30min，取出放冷，滤过，滤液蒸干，残留物置10mL量瓶中，以甲醇溶解，并加至刻度，摇匀；精密称取菌盖及菌柄样品10g，加入250mL三氯甲烷，超声处理30min，取出放冷，滤过，滤液蒸干，残留物置2mL量瓶中，以甲醇溶解，并加至刻度，摇匀；以上溶液经0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
2.3.3 对照品溶液制备 精密称取适量灵芝酸A、灵芝酸 B对照品，分别置5mL量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，摇匀，制成灵芝酸A、灵芝酸B对照品溶液，质量浓度分别为1.036mg/mL和0.964mg/mL的单一对照品储备液。精密吸取灵芝酸A储备液100μL和灵芝酸B对照品储备液500μL，用甲醇定容至5mL量瓶中，摇匀，制成灵芝酸A和灵芝酸B的混合对照品溶液，质量浓度分别为0.2072mg/mL和0.0964mg/mL。
2.3.4 方法学考察
2.3.4.1 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶液2、4、8、10、20、50μL，注入高效液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定各成分的峰面积。以进样质量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，得灵芝酸A和灵芝酸B的回归方程分别为：Y=1E+06X-47907，R2=0.9999，Y=1E+06X-27751，R2=1.0000。灵芝酸A和灵芝酸B分别在0.41～10.36μg和0.193～4.82μg范围内线性关系良好 ......
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