小檗碱对脂肪胰岛素抵抗细胞PPARγ及脂肪分泌因子表达的影响(3)
2.4 RNA提取和RT收集 各组细胞按PureLinkTMRNA Mini Kit说明书提取总RNA。RNA浓度及纯度用Nanodrop 2000核酸蛋白测定仪检测，确保吸光度在1.9～2.0。用1%琼脂糖凝胶电泳鉴定完整性。Promega逆转录试剂盒合成cDNA。
2.5 微滴式数字PCR(ddPCR) 数字PCR的反应体系：2×ddPCRTMSupermix for Probes 10 μL，模板DNA 1 μL，20×Prime Probe mixture 1 μL，DNase-free water 8 μL。将配制好的20 μL PCR反应液，转移至微滴发生卡(DG8 cartridge)中，再加入70 μL微滴发生油(droplet generation oil)后，利用QX200TM微滴式数字PCR仪的微滴生成器制备反应微滴。数字PCR循环反应条件：95 ℃ 10 min；94 ℃ 30 s ......
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2.5 微滴式数字PCR(ddPCR) 数字PCR的反应体系：2×ddPCRTMSupermix for Probes 10 μL，模板DNA 1 μL，20×Prime Probe mixture 1 μL，DNase-free water 8 μL。将配制好的20 μL PCR反应液，转移至微滴发生卡(DG8 cartridge)中，再加入70 μL微滴发生油(droplet generation oil)后，利用QX200TM微滴式数字PCR仪的微滴生成器制备反应微滴。数字PCR循环反应条件：95 ℃ 10 min；94 ℃ 30 s ......
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