图2 颠茄TAs合成途径上9个基因的数字表达谱

    Fig.2 Digital expression patterns of nine genes involved in tropane alkaloids biosynthesis in different tissues

    2.2 4个已发表基因在不同器官中的表达 数字表达谱可以在宏观上呈现一个代谢通路上所有基因的表达模式，但是具体研究某些基因的表达量还需要qPCR验证。根据NCBI上公开的4个颠茄TAs合成基因序列(CYP80F1和TRⅡ为实验室克隆)，设计qPCR引物，实验验证扩增效率均在90%～105%的有效统计范围内(表1)，无引物二聚体，表明符合qPCR要求。采用双基因作为内参，根据Pfaffl Method方法计算各基因在颠茄11个器官的相对表达量(图3)。这4个基因表达结果与数字表达谱结果基本一致，PMT，CYP80F1，H6H都只在须根中特异性表达，主根中表达极低或根本不表达，表明这3个基因存在组织特异性；TRⅡ在各器官均有表达，且须根、老叶和花瓣中表达量最高。

    图3 颠茄4个TAs合成基因的相对表达量

    Fig.3 Relative expression level of four genes involved in tropane alkaloids biosynthesis in different tissues

    2.3 不同器官中TAs含量 对颠茄各个器官中2种托品烷生物碱(莨菪碱和东莨菪碱)含量进行测定(n=3)(图4) ......