四、组织RNA提取、逆转录、实时荧光定量PCR(RT-PCR)

    心脏组织剪碎，加入小钢珠和1ml Trizol，组织匀浆振荡器研磨后，加入200μl氯仿，充分振荡混匀15s，室温静置10min，4℃ 12000转/分离心15min，取上层水相，加入等量异丙醇，充分混匀，室温10min，4℃12000转/分离心10min，弃上清，75%乙醇4℃8500转/分离心5min、室温干燥10min、DEPC水溶解，测定RNA浓度。逆转录试剂盒(TIANGEN)合成cDNA，进行qPCR、反应体系：cDNA 3μl、DEPC水3.6μl、2×Mi×7.5μl、上下游引物各0.3μl，引物序列见表2。程序如下：94℃预变性5min，循环程序94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，并收集荧光信号，共40循环。

    五、TTC染色

    小鼠麻醉后取出心脏，清除黏连组织及血液，直接放入-20℃速冻20～30min ......