2常规珠蛋白基因诊断

    应用厦门致善生物公司生产的磁珠法基因组DNA提取试剂盒和自动化仪器(LabAid820)提取所有病例的外周血基因组DNA。采用亚能生物技术有限公司(深圳)提供的α和β地贫基因检测试剂盒(gapPCR和PCRRDB方法)对所有DNA标本進行地贫基因检测。检测范围包括α地贫3种常见缺失类型(α37/、α42/、SEA/)和3种点突变类型(αQSα/、αCSα/、αWSα/)以及17种β地贫的点突变。

    3β珠蛋白基因测序

    对β珠蛋白基因(HBB)全长约2kb分成3个片段进行引物设计和基因测序。PCR引物序列见表1。PCR扩增体系为30μl：15μl的PremixLA，10pmol/μl的引物各2μl，4μl基因组DNA。PCR扩增反应条件为95℃预变性5min，95℃30s→60℃45s→72℃45s，35个循环，72℃延伸7min。琼脂糖凝胶电泳鉴定产物。将PCR扩增产物送上海英骏生物技术有限公司，使用美国ABI3100DNA测序仪双向测序 ......